Fue un encargo del duque Ludovico el Moro, se encuentra en Milán, en el refectorio del convento de Santa María delle Grazie. Leonardo, milanés de adopción desde hacía ya doce años, renunció a la consolidada técnica del fresco y trató de aplicar el color directamente a la pared después de prepararla con dos capas; así consiguió una finura de ejecución que de otro modo hubiera sido imposible. Modificó también la estructura tradicional de la escena. En todos los Cenáculos precedentes la mesa con Cristo y los Apóstoles tenía una pared al fondo, y en la mayoría de los casos, Judas estaba sentado a este lado de la mesa. Leonardo, en cambio, situó las figuras en un único plano, en grupos de tres, y abrió a sus espaldas un profundo fondo en perspectiva. También en las fisonomías y los gestos de los personajes, que tienen una dimensión mayor de la real, Leonardo hizo una elección nada habitual. Eligió como momento más dramático de la narración evangélica la frase: "uno de nosotros me traicionará". Cada Apóstol reaccionará de manera de manera diferente, expresan de ese modo una psicología individual.
